Méthode pour la stabilité métabolique
- Système de test : hépatocytes, microsomes hépatiques ou plasma cryopréservés regroupés
- Espèces des tests : souris, rat, chien, lapin, cochon nain, singe et humain. Espèces supplémentaires à la demande
- Concentrations des articles de test : deux concentrations testées par espèces (1 et 10 µM) en trois exemplaires
Stabilité métabolique dans les hépatocytes
L'article testé est incubé à deux concentrations avec environ 1 x 106 hépatocytes/mL en suspension dans le milieu E de William jusqu'à 5 points dans le temps et arrêté par l'ajout d'un solvant organique.
Des incubations témoins sont effectuées dans le milieu d'incubation uniquement pour déterminer la stabilité de l'article testé dans les conditions d'incubation. L'intégrité métabolique de chaque lot d'hépatocytes est évaluée avec 7-éthoxycoumarine ou tout autre marqueur adapté.
Stabilité métabolique dans le plasma
L'article à tester est incubé à deux concentrations dans le plasma jusqu'à 5 points dans le temps et arrêté par l'ajout d'un solvant organique. Les incubations témoins positives incluent de la procaïne (hydrolysée par carboxylestérase) ou tout autre marqueur métabolique adapté.
Stabilité métabolique dans les microsomes
L'article testé est incubé à deux concentrations avec des microsomes (0,5 mg/ml de protéine) en présence de NADPH jusqu'à 5 points dans le temps et arrêté par l'ajout d'un solvant organique. Des incubations de contrôle sont réalisées en l'absence de NADPH pour déterminer la stabilité de l'article testé dans des conditions d'incubation.
L'intégrité métabolique de chaque lot de microsomes est évaluée pour les enzymes en Phase 1 en utilisant 7-éthoxycoumarine ou tout autre marqueur adapté.
Analyse d'échantillons
Les échantillons d'incubation sont analysés pour l'article testé restant selon la méthode analytique de chromatographie liquide-spectrometrie de masse(LC-MS). Le pourcentage d'article testé restant dans les échantillons est ensuite déterminé par comparaison avec la concentration initiale. Après autorisation, certains échantillons peuvent faire l'objet d'analyses approfondies pour caractériser ou identifier les métabolites par LC-MS.